目的构建人源性抗大肠癌噬菌体Fab抗体库。方法术中剥取老年大肠癌患者系膜内转移淋巴结,提取细胞总RNA,逆转录合成cDNA,进行PCR,克隆于pComb3载体,再经电转化大肠杆菌XLI-Blue菌株,形成噬菌体抗体库,最后通过免疫印记法鉴定初级抗体库中噬菌体上有Fab段的表达。结果从系膜内转移淋巴结中扩增出650bp重链Fd和轻链基因产物,轻链基因产物插入测得转化菌数为4.7×106,鉴定插入率为70%;重链Fd基因产物测得转化菌数为3.5×106,插入率为60%;免疫印迹法鉴定成功建立噬菌体Fab抗体库,库容量达1.4×106。结论筛选大肠癌特异性抗原和相应噬菌体抗体,对大肠癌发病机制的研究以及探讨早期诊断方法有重要意义。
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