目的 构建大肠癌患者转移淋巴结Fab段噬菌体抗体库并结合蛋白质组学相关技术进行初步筛选大肠癌特异性抗原蛋白及相应的噬菌体抗体。方法 取大肠癌患者系膜转移淋巴结 ,提取总RNA ,RT PCR扩增重链Fd和轻链cDNA ,将扩增产物依次插入载体pComb3,电转感受态大肠杆菌XLI Blu ,加噬菌体VCSM13超感染。以二维凝胶电泳分离大肠癌细胞和正常大肠粘膜蛋白组并转至PVDF膜 ,将银染胶图用Melanie 112 DE分析软件进行分析 ,以大肠癌组织匀浆为靶抗原对初级抗体库进行三轮淘洗 ,再用富集抗体库和PVDF膜进行Western Blot印迹实验。结果 成功建立了大肠癌Fab段噬菌体抗体库。建立了平均 877个斑点的大肠癌平均胶图和 84 7个斑点的正常大肠粘膜平均胶图。经Western Blot印记实验我们发现了至少八个大肠癌表达而正常大肠粘膜不表达的有噬菌体抗体特异性结合活性的抗原蛋白。结论 成功建立了双盲、双向、高通量筛选大肠癌特异性抗原及其相应噬菌体抗体的方法。
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