目的探讨调节性T淋巴细胞(Treg细胞)延长经不同CD47基因型供者脾细胞预处理小鼠皮肤和心脏移植物存活时间的作用。方法以C57BL/6小鼠为受者,MHC-I错配的bm1小鼠为供者,建立MHC-I错配的小鼠皮肤和心脏联合移植模型。CD47~(-/-)DST组受鼠移植前7 d接受CD47~(-/-)bm1小鼠的脾细胞输注;CD47~(+/+)DST组受鼠移植前7 d接受CD47~(+/+)bm1小鼠的脾细胞输注;移植对照组受鼠仅行皮肤和心脏联合移植,不做其他预处理。术后通过观察移植皮片及异位心脏移植物的腹部触诊判断移植物存活情况,绘制移植物存活曲线;免疫组化染色检测心脏移植物内Treg细胞浸润情况,流式细胞技术检测脾脏及淋巴结中Treg细胞数量及比例的变化,混合淋巴细胞反应(MLR)检测供者特异性T淋巴细胞增殖及Treg细胞对于供者特异性T淋巴细胞增殖的抑制能力。结果与移植对照组比较,CD47~(+/+)DST组皮肤移植物平均存活时间(MST)为20d,比移植对照组的17.5 d略延长,差异无统计学意义(P>0.05);而CD47~(+/+)DST组皮肤移植物的存活时间显著延长至46.5 d(P<0.01)。CD47~(-/-)DST组心脏移植物的MST为17 d,与移植对照组的15.5 d相比较,差异无统计学意义(P>0.05);而CD47~(+/+)DST组心脏移植物的存活时间显著延长至42.5d(P<0.01)。移植后18 d,CD47~(-/-)DST组心脏移植物内可见大量Treg细胞浸润,而同时间点的CD47~(+/+)DST组心脏移植物内未见明显Treg细胞浸润。移植后18 d,与CD47~(+/+)DST组比较,CD47~(-/-)DST组脾脏中Treg细胞数量显著增加(P<0.01),但Treg细胞的比例却明显低于CD47~(+/+)DST组(P<0.05);CD47~(+/+)DST组和CD47~(-/-)DST组淋巴结中Treg细胞数量均有增加,组间比较差异无统计学意义(P>0.05),但CD47~(+/+)DST组淋巴结中Treg细胞的比例明显高于CD47~(-/-)DST组(P<0.01)。术后7 d的MLR显示,CD47~(+/+)DST组供者T淋巴细胞增殖明显明显受到抑制,与CD47~(-/-)DST组和移植对照组比较,差异明显(P<0.05);各组Treg细胞对于效应性T淋巴细胞的抑制作用基本一致。结论供者特异性输注中输注细胞表面表达CD47对于延长移植物存活时间至关重要;Treg细胞的比例对于延长移植物存活时间起主要作用,而不是单纯Treg细胞数量增加或单个Treg细胞抑制功能的增强。
(8.0+极速模式)