目的:探讨川崎病小鼠血清外泌体中微小RNA(miR)-328-3p和miR-671-5p表达水平与川崎病的相关性及其在静脉注射免疫球蛋白(IVIG)治疗后的变化,为川崎病的早期诊断及疗效评价提供潜在生物标志物。方法:12只4周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组和IVIG组,每组4只。模型组和IVIG组小鼠腹腔注射干酪乳杆菌细胞壁提取物(LCWE)构建川崎病模型,对照组小鼠腹腔注射等体积生理盐水;IVIG组小鼠第5天腹腔注射IVIG干预。4周后,取各组小鼠心脏组织,采用HE染色法观察各组小鼠心脏组织病理形态表现。取各组小鼠血液并分离外泌体,采用粒径检测、透射电子显微镜检测及Western blotting法对外泌体进行鉴定。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组小鼠血清外泌体中miR-328-3p、miR-134-5p和miR-671-5p表达水平。结果:HE染色,对照组小鼠心肌结构规整,冠状动脉无炎症细胞浸润;模型组小鼠局部冠状动脉可见弥漫性炎症细胞浸润;IVIG组小鼠心肌组织中炎症细胞浸润较模型组明显减少。外泌体鉴定,透射电子显微镜观察到直径为30～150 nm的球形或椭圆形囊泡,粒径主峰在150 nm内,外泌体标志物CD9和CD63呈阳性表达。RT-qPCR法,与对照组比较,模型组小鼠血清外泌体中miR-328-3p表达水平明显升高(P<0.05),miR-671-5p表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,IVIG组小鼠血清外泌体中miR-328-3p表达水平明显降低(P<0.05),miR-671-5p表达水平明显升高(P<0.01);3组小鼠血清外泌体中miR-134-5p表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-328-3p表达上调和miR-671-5p表达下调均与川崎病有关联,IVIG治疗后可逆转此异常表达,提示二者有望作为川崎病诊断和疗效评估的潜在分子生物标志物。
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